細胞收到后要這樣處理

來源: 上海中喬新舟生物科技有限公司   2020-6-5   訪問量:870評論(0)

凍存管收到后保存方案︰

1. 收到細胞株包裹時,請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形,若有請立即通知。細胞株請盡速開始培養, 或立即冷凍保存(置于–70 °C,隔夜后,移到liq N2)。

2. 冷凍細胞解凍程序:

一、根據細胞說明書來配置培養基,不同的細胞株適應的培養基不同,請務必按細胞需求來配置。

絕大多數的細胞均無法立即適應不同的基礎培養基或不同的血清種類,所以當細胞換成你們自己的培養基生長狀態變差或者速度變緩的時候,不要著急,可以靜養一段時間。給細胞一個適應的時間,不要一日看三回,操之過急;如實驗確實緊張,可以使用中喬新舟細胞株完全培養基,此培養基是按細胞精心優化,種類豐富,適合中喬新舟任意一株細胞的培養。若因實驗需要,必須有所不同時, 請務必以緩慢比例漸次改變培養基組成,確定細胞生長適應后,方進行實驗。


二、FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清),對細胞而言差異極大,請務必依據細胞說明書選擇相應的血清 ,這點很重要。

細胞復蘇的方法:

三 、將培養基置于37 °C 水槽中回溫, 回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之, 移入無菌操作臺內。

取出冷凍管, 立即放入37 °C 水槽中快速解凍,水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿, 否則易發生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化后,以70%ethanol擦拭冷凍管外部,移入無菌操作臺

2.4. 依據細胞種類和濃度,于無菌操作臺內取10 ml 培養基加至T25 或T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液,

緩緩加入T25 或T75 flask 內之培養基,混合均勻,放入37 °C,5 % CO2 培養箱培養。

2.5. 對絕大多數細胞而言,1 % 以下的冷凍保護劑DMSO,不會對細胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍的 細胞中去除,待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可。

對極少數因對DMSO 敏感或會造成細胞分化之細胞,需立即去除DMSO , 去除DMSO的方法如下:可將解凍后之細胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養基中,離心300 xg (約1000 rpm),5 分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養基,將細胞均勻混合后,轉移至培養瓶中,再放入37 °C, 5 % CO2 培養箱培養。

活細胞的處理方式︰

1. 細胞在寄送過程中,為避免起泡造成細胞脫落死亡,T25 flask 均加滿培養基。收到后,請檢查flask 外觀,并于顯微鏡下觀察細胞生長和有無污染現象,若有任何問題,不要打開蓋子,請立即通知我們。

2. 將原封的T25 flask細胞 靜置于細胞 培養箱中,讓細胞穩定一下,并讓運送過程中少數脫落的細胞可再附著生長。2-4小時后,無菌操作箱內取出flask內之培養基,僅留約5-10ml 培養基于flask 內,如無需傳代,請置于培養箱中繼續培養,如細胞已達到85%以上的密度,請立即將細胞做傳代處理。



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